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La
séparation des saponines est très délicate. Pendant longtemps les méthodes
chromatographiques dites classiques ont été utilisées (56), telle la
chromatographie sur papier, la chromatographiesur couche mince de silice ou de
cellulose (C C M) et la chromatographie sur la colonne de gel de silice.
Cependant, ces méthodes se sont avérées inadéquates pour la séparation
d’un mélange complexe de saponines.
L’apparition de nouvelles techniques chromatographiques telles la
chromatographie contre courant à gouttelettes (D C C C : dropelet counter
current chromatography) et la chromatographie liquide haute performance (H P L
C) ont permet de faire de grand progrès dans les séparations de produits
naturels d’une façon générales et des saponines en particuliers.
1-
la chromatographie contre courant à gouttelettes (DCCC):
Cette
technique de séparation entièrement liquide-liquide a été utilisé avec succès
pour la séparation d’un grand nombre de produits naturels et plus précisément
des produits polaires. Elle est basées sur la répartition du soluté entre un
flux de gouttelettes constituant la phase mobile et passant à travers des
colonnes remplies de phase stationnaire. La phase mobile peut être dense ou
moins denses que la phase stationnaire. Dans le premier cas, la phase mobile est
délivrée par le haut de la colonne (mode descendant), dans le second cas, elle
délivrée par le bas de la colonne (mode ascendant). Le plus grand avantage de
cette technique réside en l’absence de support solide qui peut donner une
adsorption irréversible de soluté. C’est un point particulièrement intéressant
dans la séparation des produits naturels biologiquement actifs. Pour permettre
une meilleure séparation, la D C C C est couplée à la chromatographie sur
colonne de gel de silice.
2-
la chromatographie liquide haute performance (H P L C):
C’est une
technique utilisé pour la séparation et le dosage des mélanges. L’analyse
du tourteau est faite dans les conditions semi-préparatives suivantes:
Appareil de type SPECTRA-PHYSICS 8700 muni d’un détecteur UV (l=
206nm).
Colonne ODS (octadecylsilane) de 25 cm de longueur et 9,44 mm de diamètre
intérieur.
Le solvant d’élution est le méthanol pur avec un débit de 1 ml / mn.
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